一、儀器概述：
賽多利斯流式細胞分析儀是專為高通量篩選而設(shè)計的流式細胞術(shù)平臺，集儀器、軟件和試劑于一體。采用“氣隙間隔”采樣方法，能夠在短短5分鐘內(nèi)完成96孔板處理和分析，20分鐘內(nèi)完成384孔板處理和分析。具備多達27個檢測通道（25種顏色選項），支持四激光配置（405nm、488nm、561nm、637nm等組合），檢測范圍覆蓋細胞、微球、酵母細胞等低至0.2µm的顆粒。最小樣本量低至4微升，可靈活兼容96孔板和384孔板。儀器尺寸為66cm×130cm×63cm。iQue®系列支持48小時連續(xù)運行，無需人工干預(yù)。其直觀的iQue®Forecyt®軟件簡化了各級用戶的操作流程，具有自動化、綜合分析和高級可視化工具。
二、實驗室環(huán)境與安裝要求
作為精密儀器，對安裝環(huán)境有嚴格要求。首先，儀器需要穩(wěn)定的電壓和潔凈的氣源，建議單獨配備穩(wěn)壓電源和空氣過濾器，避免電壓波動或雜質(zhì)影響采樣精度。其次，實驗室需保持20-25℃的恒溫環(huán)境，濕度控制在40-60%，遠離強磁場和粉塵，防止影響檢測通道的靈敏度。儀器應(yīng)安置在平穩(wěn)的臺面上，避免震動。iQue®Qmax推車設(shè)計非常實用，能在長時間運行期間便捷管理鞘液和廢液，建議規(guī)劃靠近廢液處理區(qū)的位置以方便日常維護。此外，需確保以太網(wǎng)線纜已將iQue®連接到正確的計算機或網(wǎng)絡(luò)端口。
三、開機操作流程
賽多利斯流式細胞分析儀的開機操作需要遵循規(guī)范流程：
第一步：外部檢查。開機前務(wù)必檢查鞘液桶和廢液桶，確認鞘液充足、廢液桶未滿。檢查鞘液過濾器是否有氣泡，如有需執(zhí)行排氣泡操作。確認進樣針和導管正確安裝在蠕動泵上，沒有被蠕動泵夾夾住。
第二步：電源開啟。打開穩(wěn)壓電源，穩(wěn)定數(shù)分鐘后再開啟儀器主電源。如果帶液流車，需注意打開液流車電源開關(guān)。使用儀器背面鄰近電源線處的開關(guān)打開儀器。
第三步：軟件啟動。啟動計算機并打開iQue®Forecyt®軟件。軟件啟動后系統(tǒng)將自動進入初始化程序，包括液路灌注和系統(tǒng)自檢。
第四步：質(zhì)量控制。使用iQue®QCBeads執(zhí)行每日質(zhì)量控制，覆蓋所有通道。QCBeads是一種混合物微球，可在多種波長和強度下發(fā)出熒光，覆蓋所有檢測通道。
第五步：系統(tǒng)預(yù)熱。儀器需要一定時間使激光器和液流系統(tǒng)達到穩(wěn)定狀態(tài)，建議預(yù)熱至系統(tǒng)提示“Ready”后再開始實驗。假期歸來長期未用的儀器，建議提前24小時開機預(yù)熱。
四、實驗操作與數(shù)據(jù)采集
樣本制備。將細胞接種到V形底96孔板或384孔板中，按照試劑盒說明標記樣品，孵育并清洗孔板。樣本在上機前需進行過濾處理，避免沉淀物堵塞噴嘴。細胞必須制成單細胞懸浮狀態(tài)，不能聚集，也不允許有大量細胞碎片存在。iQue®系統(tǒng)的板載振蕩功能可在取樣前確保樣本適當重懸，有助于改善QC結(jié)果及一致性。
實驗設(shè)置。在Forecyt®軟件的Design選項卡中設(shè)置實驗參數(shù)，包括添加孔板、指定孔內(nèi)容物和分析參數(shù)等。在Protocol選項卡中設(shè)置采集參數(shù)，如進樣時間（SipTime）、樣品順序、振蕩和清潔等。
數(shù)據(jù)采集。樣本以“氣隙間隔”流傳送至檢測器——即“樣本—氣隙—樣本”的采樣技術(shù)，可以一次處理整個孔板的數(shù)據(jù)。自動堵塞檢測功能可在必要時提醒用戶并暫停實驗。指示燈提供可視化確認，確保一切運行順暢。
五、日常維護（每日/每周/每月）
賽多利斯流式細胞分析儀的日常維護是延長儀器壽命和保證數(shù)據(jù)質(zhì)量的關(guān)鍵。
每日維護：實驗結(jié)束后，啟動自動清洗程序沖洗進樣針和管路，清除殘留的細胞或微球碎片。檢查鞘液和廢液余量，及時補充或更換，避免影響下一次實驗。檢查玻璃瓶液位并確認浮子在正常工作，浮子誤報液位可能導致液位讀數(shù)錯誤。
每周維護：用無塵布擦拭機身和孔板托盤，用壓縮空氣清潔檢測通道插槽。備份實驗數(shù)據(jù)，避免數(shù)據(jù)丟失。運行一次快速校準程序，確保通道精度穩(wěn)定。每周進行一次深度沖洗液路，可用10%次氯酸鈉溶液沖洗5分鐘，再用去離子水沖洗15分鐘。
每月維護：更換進樣針和管路耗材，檢查氣隙間隔采樣系統(tǒng)的密封性。深度清潔廢液管路，防止堵塞。更新Forecyt®軟件至最新版本，修復(fù)已知漏洞。流路維護建議每176小時執(zhí)行一次。iQue®BottleFiltersSet也建議在176小時運行時間后更換。
六、耗材管理與更換周期
正常運行依賴于規(guī)范的耗材管理。
進樣針和導管：建議使用20小時后更換，以防止老化和堵塞。
鞘液與鞘液添加劑：iQue®鞘液添加劑濃縮液是日常啟動的耗材，用于使管路和流通池中的樣本流動順暢。將一瓶鞘液添加劑濃縮液加入到1升水中即可配置成工作液。
QC微球：用于每日質(zhì)量控制，建議制備后儲存時長不超過5天，且儲存在2-8℃下。正確的制備方法是將2滴微球加入盛裝在1.5mL微量離心管中的300μL緩沖溶液（含1%PBS和0.1%BSA）中，臨采樣前在渦旋振蕩器中混勻。
瓶式過濾器：iQue®BottleFiltersSet在176小時運行時間后需要更換。
維護試劑盒：iQue®FluidicsMaintenanceKit提供全面的流路維護耗材，支持自動化監(jiān)測流控系統(tǒng)以確保最佳性能。
七、常見故障與排除
輕微堵孔預(yù)警。這是最常見的故障類型。堵塞檢測功能會實時彈出警報，提示進樣針有殘留。按照軟件給出的響應(yīng)方案，啟動自動清洗程序，5分鐘內(nèi)即可解決問題。如自上次流路維護以來的運行時間已接近或超過176小時，需再次執(zhí)行流路維護。也可更換進樣針和導管，然后清潔進樣針和導管。
檢測通道信號波動。如樣本制備和耗材更換均無異常，需檢查通道電壓設(shè)置?？赡苁悄骋煌ǖ离妷浩茖е拢匦滦屎笮盘柨苫謴?fù)穩(wěn)定。
高背景噪音。儀器中有碎屑時可能會產(chǎn)生較高的背景噪音，執(zhí)行流式細胞儀快速清潔程序并除氣泡可解決此問題。
QC低事件計數(shù)。微球計數(shù)失敗常見原因包括：微球制備和儲存方式不當、進樣針和導管老化、流路維護不及時。
Err394錯誤。表示設(shè)備在啟動時未識別到外接存儲模塊?？上葦嚯娚宰鞯却笾匦麻_機，排除臨時識別異常；檢查內(nèi)部接線是否牢固。
儀器無法進入Ready狀態(tài)。可能原因包括管路漏氣、鞘液罐接口漏氣、密封圈破損老化等，應(yīng)遵循由簡到難的順序逐一排查。
如上述方法無法解決問題，可聯(lián)系賽多利斯技術(shù)支持團隊。必要時對儀器執(zhí)行電源重啟——先關(guān)閉Forecyt®中檢測器的電源，然后使用儀器背面開關(guān)關(guān)閉儀器，此操作將使儀器進入較長時間的開機清潔程序。
八、iQue®Forecyt®軟件使用指南
iQue®Forecyt®軟件是賽多利斯流式細胞分析儀的核心控制與分析平臺。
新建實驗：從File下拉菜單選擇NewExperiment，或點擊圖標打開新建實驗窗口。為實驗命名并選擇保存位置。
實驗設(shè)計：Design選項卡是設(shè)置實驗參數(shù)的主要界面，包括添加孔板、指定孔內(nèi)容物、分析參數(shù)等?？啥x樣品類型、位置以及稀釋系列、細胞類型等額外注釋層。
采集協(xié)議：Protocol選項卡用于設(shè)置采集參數(shù)，如進樣時間、樣品順序、振蕩和清潔。
數(shù)據(jù)分析：Forecyt®軟件具有自動化、綜合分析和高級可視化工具。用戶可快速優(yōu)化檢測、調(diào)整設(shè)門并實時查看更新的全孔板分析。軟件支持標準集群篩選工具，集成了孔板級注釋、分析和可視化功能。
軟件更新：如需升級到最新版本的iQue®Forecyt®軟件，可發(fā)送電子郵件至賽多利斯技術(shù)支持團隊。
九、樣品制備與實驗注意事項
樣品制備質(zhì)量直接影響流式細胞分析結(jié)果的準確性和可靠性。
單細胞懸液制備。流式細胞儀測定的是每個顆粒通過光路時的信號，因此細胞必須制成單細胞懸浮狀態(tài)，不能聚集，也不允許有大量細胞碎片存在。從組織樣本中分離細胞時需注意操作溫和。
染色與孵育。按照試劑盒說明標記樣品，注意避光孵育。熒光染色后需充分清洗以去除未結(jié)合的抗體。
上樣前準備。所有溶液都要進行過濾處理，樣本在上機前也要過濾，以免時間久了出現(xiàn)沉淀物而堵塞噴嘴。取樣前的板載振蕩功能可確保樣本適當重懸。
實驗記錄。建議建立儀器使用臺賬，詳細記錄檢測樣本、耗材消耗和堵孔情況，既方便追溯實驗數(shù)據(jù)，也能及時發(fā)現(xiàn)儀器潛在問題。
十、生物安全與操作規(guī)范
賽多利斯流式細胞分析儀的使用涉及生物樣本，需嚴格遵守生物安全規(guī)范。
個人防護。操作人員必須穿戴實驗服、護目鏡和手套等個人防護裝備。
樣本處理。所有生物樣本應(yīng)按相應(yīng)生物安全等級（BSL）要求處理和運輸。未固定的生物樣本運行時需特別注意氣溶膠防護。
廢液處理。廢液桶中應(yīng)加入適量消毒劑（如漂白水原液）進行無害化處理。廢液需按照實驗室生物廢棄物處理規(guī)范處置。
儀器消毒。定期用適當?shù)南緞x器表面和管路進行消毒。常用消毒溶液包括1%次氯酸鈉或70-80%乙醇。使用10%漂白劑溶液進行系統(tǒng)清洗也是常見做法。
十一、性能優(yōu)化與校準
為保證數(shù)據(jù)質(zhì)量，定期校準和性能驗證。
每日QC。使用iQue®QCBeads執(zhí)行每日質(zhì)量控制，運行DailyQC測試。QC測試可驗證所有通道的性能是否在規(guī)格范圍內(nèi)。
快速校準。建議每周進行一次快速校準程序，確保通道精度穩(wěn)定。定期校準通道參數(shù)的重要性不容忽視，可避免因電壓偏移導致的信號波動。
驗證微球。用2滴驗證微球和300µLQsol緩沖液制備一瓶新的驗證微球。按規(guī)格制備新的微球，確保QC結(jié)果可靠。
設(shè)門優(yōu)化。確認已經(jīng)為細胞群適當設(shè)門，以產(chǎn)生準確的測量結(jié)果。
十二、儀器長期停用與重啟注意事項
假期歸來或長期未用的儀器需要額外呵護。
停用前處理。如需將儀器移動或存放超過一個月，必須使用PurgeFluidics功能從管路中排出所有液體。
重啟前準備。提前24小時開機預(yù)熱，檢查溫度和濕度是否符合要求。用標準微球測試檢測精度，若出現(xiàn)偏差及時校準。
重啟后處理。運行完整的清洗和校準流程，確保樣本進樣均勻。管路殘留干涸樣本可能導致檢測精度下降，深度清洗后可恢復(fù)正常。
十三、實驗室管理與培訓制度
良好的實驗室管理制度是儀器高效運行的保障。
專人負責。儀器應(yīng)由專人負責日常登記和基礎(chǔ)維護。其他成員需通過線上預(yù)約使用，預(yù)約時需備注孔板類型和實驗類型。
操作培訓。建議組織內(nèi)部實操培訓，考核合格者方可獨立使用儀器。對規(guī)范操作、高效完成實驗且無耗材浪費的成員給予獎勵，可調(diào)動團隊積極性。
使用臺賬。建立儀器使用臺賬，詳細記錄檢測樣本、耗材消耗和堵孔情況，既方便追溯實驗數(shù)據(jù)，也能及時發(fā)現(xiàn)儀器潛在問題。
產(chǎn)品介紹
